TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9330-2:2012 (ISO 14461-2:2005) VỀ SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA – KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG TRONG PHÒNG THỬ NGHIỆM VI SINH VẬT – PHẦN 2: XÁC ĐỊNH ĐỘ TIN CẬY SỐ ĐẾM KHUẨN LẠC CỦA CÁC ĐĨA SONG SONG VÀ CÁC BƯỚC PHA LOÃNG LIÊN TIẾP

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA

TCVN 9330-2:2012

ISO 14461-2:2005

SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA – KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG TRONG PHÒNG THỬ NGHIỆM VI SINH VẬT – PHẦN 2: XÁC ĐỊNH ĐỘ TIN CẬY SỐ ĐẾM KHUẨN LẠC CỦA CÁC ĐĨA SONG SONG VÀ CÁC BƯỚC PHA LOÃNG LIÊN TIẾP

Milk and milk products – Quality control in microbiological laboratories – Part 2: Determination of the reliability of colony counts of parallel plates and subsequent dilution steps

Lời nói đầu

TCVN 9330-2:2012 hoàn toàn tương đương với ISO 14461-2:2005;

TCVN 9330-2:2012 do Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia biên soạn, Bộ Y tế đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố;

Bộ tiêu chuẩn TCVN 9330:2012 Sữa và sản phẩm sữa – Kiểm soát chất lượng trong phòng thử nghiệm vi sinh vật gồm có các phần sau đây:

– TCVN 9330-1:2012 Sữa và sản phẩm sữa – Kiểm soát chất lượng trong phòng thử nghiệm vi sinh vật – Phần 1: Đánh giá năng lực thực hiện đếm khuẩn lạc;

– TCVN 9330-1:2012 Sữa và sản phẩm sữa – Kiểm soát chất lượng trong phòng thử nghiệm vi sinh vật – Phần 2: Xác định độ tin cậy số đếm khuẩn lạc của các đĩa song song và các bước pha loãng liên tiếp.

Lời giới thiệu

Mỗi phương pháp vi sinh vật bao gồm một số bước kế tiếp theo trình tự cụ thể (lấy mẫu con, pha loãng mẫu, đổ đĩa và đếm khuẩn lạc). Độ không đảm bảo đo của kết quả cuối cùng được xác định bởi tính biến thiên của tất cả các bước liên quan trong quy trình phân tích.

Để thu được các kết quả có độ không đảm bảo đo không quá lớn so với kết quả dự kiến khi thực hiện đúng phương pháp, người phân tích cần tuân thủ của quy định của Thực hành phòng thử nghiệm tốt (GLP).

Có ba yếu tố quan trọng nhất để đạt được số đếm đĩa chính xác là:

– tính đồng nhất của vật liệu mẫu,

– tính chính xác của các bước pha loãng,

– kỹ thuật cấy và/hoặc đếm khuẩn lạc ở các đĩa nuôi cấy.

Có thể đánh giá khả năng thực hiện kỹ thuật đếm khuẩn lạc của phòng thử nghiệm và đưa ra độ biến thiên mong muốn của phương pháp bằng cách đồng hóa kỹ vật liệu mẫu, tạo nhiều dãy dịch pha loãng và cấy một số đĩa từ cùng một dịch pha loãng.

Độ biến thiên quá lớn cho thấy ít nhất một trong các bước khi thực hiện phương pháp nằm ngoài tầm kiểm soát. Xác định các bước này bằng cách so sánh các đĩa nuôi cấy lặp lại, các dịch pha loãng khác nhau và các dãy pha loãng khác nhau. Khi phát hiện các bước của phương pháp phân tích có sự biến thiên quá lớn, phải tiến hành các biện pháp cần thiết để kiểm soát các bước trên.

 

SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA – KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG TRONG PHÒNG THỬ NGHIỆM VI SINH VẬT – PHẦN 2: XÁC ĐỊNH ĐỘ TIN CẬY SỐ ĐẾM KHUẨN LẠC CỦA CÁC ĐĨA SONG SONG VÀ CÁC BƯỚC PHA LOÃNG LIÊN TIẾP

Milk and milk products – Quality control in microbiological laboratories – Part 2: Determination of the reliability of colony counts of parallel plates and subsequent dilution steps

1. Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này mô tả quy trình thường xuyên để đánh giá kết quả định lượng vi sinh vật bằng phương pháp đếm khuẩn lạc với các bước pha loãng thập phân liên tiếp và cấy một đĩa hoặc hai đĩa song song ở mỗi nồng độ pha loãng.

Quy trình này được áp dụng định kỳ trong các phòng thử nghiệm thực hiện kỹ thuật đếm khuẩn lạc. Quy trình này đưa ra tiêu chí chấp nhận sự khác nhau giữa các kết quả thu được ở các đĩa song song và ở các bước pha loãng liên tiếp, như sau:

a) So sánh kết quả (số đếm khuẩn lạc) thu được từ các đĩa song song với các giới hạn trong bảng với số đếm tương ứng. Nếu vượt quá giới hạn thì có thể đã xảy ra một lỗi kỹ thuật nào đó khi tiến hành xác định song song.

b) So sánh kết quả (tổng số đếm khuẩn lạc) của hai đĩa song song ở hai bước pha loãng thập phân liên tiếp với các giới hạn trong bảng với tổng số đếm tương ứng. Nếu vượt quá giới hạn thì có thể đã xảy ra một lỗi kỹ thuật nào đó trong quá trình pha loãng.

c) Nếu số trường hợp vượt quá các giới hạn nêu trên nhiều hơn dự kiến thì quy trình thử nghiệm đó có thể thiếu độ tin cậy.

CHÚ THÍCH: Công thức tính các giá trị trong Bảng 1 và Bảng 2 được nêu và giải thích trong Điều 7.

2. Tài liệu viện dẫn

Các tài liệu viện dẫn sau rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).

TCVN 9330-1 (ISO 14461-1) Sữa và sản phẩm sữa – Kiểm soát chất lượng trong phòng thử nghiệm vi sinh vật – Phần 1: Đánh giá năng lực thực hiện đếm khuẩn lạc.

3. Thuật ngữ và định nghĩa

Trong tiêu chuẩn này sử dụng thuật ngữ và định nghĩa sau:

3.1. Số đếm khuẩn lạc (colony count)

Số lượng các vi sinh vật đếm được bằng phương pháp nêu trong TCVN 9330-1 (ISO 14461-1).

CHÚ THÍCH: Số lượng vi sinh vật được biểu thị theo gam hoặc mililit mẫu thử.

4. Nguyên tắc

So sánh kết quả đếm thu được với các giới hạn trong bảng cho từng số đếm cụ thể. Đánh giá kết quả dựa vào sự vượt quá các giới hạn. Tính và giải thích các giá trị trong bảng.

5. Cách tiến hành

5.1. Yêu cầu chung

Quy trình này phải được áp dụng thường xuyên trong các phòng thử nghiệm sử dụng kỹ thuật đếm khuẩn lạc. Trong mọi trường hợp, phải áp dụng phương pháp chuẩn hóa cho kỹ thuật đếm khuẩn lạc.

Nếu phương pháp được sử dụng không phù hợp với tiêu chuẩn quốc tế hoặc tiêu chuẩn được chấp nhận khác thì phải mô tả chi tiết phương pháp và tuân thủ đúng phương pháp.

Trong trường hợp phương pháp được tiến hành với chỉ một đĩa trong mỗi bước pha loãng thì quy trình được mô tả ở 5.2 phải được thực hiện với một tần số tối thiểu nhất định (ví dụ như một lần trong một trăm đơn vị mẫu được phân tích.)

5.2. Kết quả đếm hai đĩa song song

So sánh kết quả (số đếm khuẩn lạc) của hai đĩa song song với giới hạn trong Bảng 1.

So sánh số đếm cao và số đếm thấp của một cặp kết quả thu được với số đếm khuẩn lạc tương ứng trong Bảng 1. Sử dụng số đếm cao trong Bảng 1 làm căn cứ so sánh. Sau đó, so sánh số đếm thấp trong Bảng 1 với số đếm thấp thu được.

Nếu số đếm thấp thu được nhỏ hơn số đếm thấp trong Bảng 1 thì khả năng không chấp nhận sự khác nhau giữa kết quả của hai đĩa song song thu được là cao. (Xem kết quả của bước pha loãng thứ nhất ở Ví dụ 1 và Ví dụ 2 trong Điều 7).

Nếu số đếm thấp thu được lớn hơn hoặc bằng số đếm thấp trong bảng thì sự khác nhau giữa kết quả của hai đĩa song song được chấp nhận. (Xem kết quả của bước pha loãng thứ hai ở Ví dụ 1 và Ví dụ 2 trong Điều 7).

5.3. Tổng của các kết quả số đếm của các bước pha loãng liên tiếp

5.3.1. Sử dụng để kiểm tra tiếp theo các số đếm khuẩn lạc của hai dãy đĩa song song đạt phép thử trong 5.2. So sánh các tổng của các số đếm khuẩn lạc từ các đĩa song song qua hai bước pha loãng thập phân liên tiếp với giới hạn trong Bảng 2.

Đối với tổng số đếm thu được ở bước pha loãng 10^-x, so sánh tổng quan sát được ở bước pha loãng 10^-(x+1) với giới hạn dưới trong bảng cho tổng đó. Các tổng quan sát được ở bước pha loãng 10^-(x+1) có giá trị nằm trong khoảng giới hạn nêu trong Bảng 2 được chấp nhận.

Các tổng số đếm thu được nằm ngoài các giới hạn này cho thấy tỉ lệ các số đếm khuẩn lạc thu được qua hai bước pha loãng thập phân có độ chệch đáng kể so với tỉ lệ dự kiến.

5.3.2. Sử dụng để kiểm tra tiếp theo các số đếm khuẩn lạc của các đĩa song song mà không được phép thử trong 5.2 hoặc các số đếm của một đĩa trong mỗi bước pha loãng. So sánh các số đếm của các đĩa qua hai bước pha loãng thập phân liên tiếp với các giới hạn trong Bảng 2.

Đối với số đếm thu được ở bước pha loãng 10^-x, so sánh số đếm thu được ở bước pha loãng 10^-(x+1) với giới hạn dưới trong bảng cho số đếm đó. Các số đếm thu được ở bước pha loãng 10^-(x+1) có giá trị nằm trong khoảng giới hạn của Bảng 2 được chấp nhận.

Các số đếm thu được nằm ngoài những giới hạn này cho thấy tỉ lệ các số đếm khuẩn lạc thu được qua hai bước pha loãng thập phân có độ chệch đáng kể so với tỉ lệ dự kiến. (Hai phép so sánh kết quả được nêu trong Ví dụ 1 và Ví dụ 2 trong Điều 7).

Xem Hình 1 về lưu đồ của quy trình.

CHÚ THÍCH: Dấu (-) biểu thị kết quả được chấp nhận có giá trị thuộc giới hạn. Dấu (+) biểu thị kết quả nằm ngoài giới hạn do lỗi kỹ thuật.

Hình 1 – Biểu đồ mô tả sự kiểm tra quy trình đếm khuẩn lạc và đánh giá kết quả

6. Đánh giá

6.1. Các bảng kết quả

Đối với mỗi phép thử được mô tả trong 5.3.1 và 5.3.2, các kết quả nằm ngoài các giới hạn trong Bảng 1 hoặc Bảng 2 thường không được xảy ra nhiều hơn một lần trong 100 lần thử. Nếu các kết quả nằm ngoài các giới hạn này xảy ra thường xuyên hơn thì phải rà soát lại quy trình thử nghiệm vi sinh.

Bảng 1 – Các giới hạn quy ước cho số đếm khuẩn lạc của hai đĩa Petri song song

(với xác suất 99 % đối với mỗi phép so sánh)

Số đếm khuẩn lạc				Số đếm khuẩn lạc				Số đếm khuẩn lạc
cao	thấp	tổng		cao	thấp	tổng		cao	thấp	tổng
10	2	12		54	31	85		98	66	164
11	3	14		55	32	87		99	67	166
12	3	15		56	32	88		100	67	167
13	4	17		57	33	90		101	68	169
14	4	18		58	34	92		102	69	171
15	5	20		59	35	94		103	70	173
16	5	21		60	36	96		104	71	175
17	6	23		61	36	97		105	71	176
18	6	24		62	37	99		106	72	178
19	7	26		63	38	101		107	73	180
20	7	27		64	39	103		108	74	182
21	8	29		65	39	104		109	75	184
22	9	31		66	40	106		110	76	186
23	9	32		67	41	108		111	76	187
24	10	34		68	42	110		112	77	189
25	11	36		69	43	112		113	78	191
26	11	37		70	43	113		114	79	193
27	12	39		71	44	115		115	80	195
28	12	40		72	45	117		116	81	197
29	13	42		73	46	119		117	81	198
30	14	44		74	46	120		118	82	200
31	14	45		75	47	122		119	83	202
32	15	47		76	48	124		120	84	204
33	16	49		77	49	126		121	85	206
34	16	50		78	50	128		122	86	208
35	17	52		79	50	129		123	86	209
36	18	54		80	51	131		124	87	211
37	19	56		81	52	133		125	88	213
38	19	57		82	53	135		126	89	215
39	20	59		83	54	137		127	90	217
40	21	61		84	54	138		128	91	219
41	21	62		85	55	140		129	91	220
42	22	64		86	56	142		130	92	222
43	23	66		87	57	144		131	93	224
44	24	68		88	58	146		132	94	226
45	24	69		89	58	147		133	95	228
46	25	71		90	59	149		134	96	230
47	26	73		91	60	151		135	96	231
48	27	75		92	61	153		136	97	233
49	27	76		93	62	155		137	98	235
50	28	78		94	62	156		138	99	237
51	29	80		95	63	158		139	100	239
52	29	81		96	64	160		140	101	241
53	30	83		97	65	162		141	102	243

 

Số đếm khuẩn lạc				Số đếm khuẩn lạc				Số đếm khuẩn lạc
cao	thấp	tổng		cao	thấp	tổng		cao	thấp	tổng
142	102	244		188	142	330		234	182	416
143	103	246		189	143	332		235	183	418
144	104	248		190	144	334		236	184	420
145	105	250		191	144	335		237	185	422
146	106	252		192	145	337		238	186	424
147	107	254		193	146	339		239	186	425
148	107	255		194	147	341		240	187	427
149	108	257		195	148	343		241	188	429
150	109	259		196	149	345		242	189	431
151	110	261		197	150	347		243	190	433
152	111	263		198	151	349		244	191	435
153	112	265		199	151	350		245	192	437
154	113	267		200	152	352		246	193	439
155	113	268		201	153	354		247	194	441
156	114	270		202	154	356		248	194	442
157	115	272		203	155	358		249	195	444
158	116	274		204	156	360		250	196	446
159	117	276		205	157	362		251	197	448
160	118	278		206	158	364		252	198	450
161	119	280		207	158	365		253	199	452
162	119	281		208	159	367		254	200	454
163	120	283		209	160	369		255	201	456
164	121	285		210	161	371		256	202	458
165	122	287		211	162	373		257	202	459
166	123	289		212	163	375		258	203	461
167	124	291		213	164	377		259	204	463
168	125	293		214	165	379		260	205	465
169	125	294		215	165	380		261	206	467
170	126	296		216	166	382		262	207	469
171	127	298		217	167	384		263	208	471
172	128	300		218	168	386		264	209	473
173	129	302		219	169	388		265	210	475
174	130	304		220	170	390		266	210	476
175	131	306		221	171	392		267	211	478
176	131	307		222	172	394		268	212	480
177	132	309		223	172	395		269	213	482
178	133	311		224	173	397		270	214	484
179	134	313		225	174	399		271	215	486
180	135	315		226	175	401		272	216	488
181	136	317		227	176	403		273	217	490
182	137	319		228	177	405		274	218	492
183	138	321		229	178	407		275	218	493
184	138	322		230	179	409		276	219	495
185	139	324		231	179	410		277	220	497
186	140	326		232	180	412		278	221	499
187	141	328		233	181	414		279	222	501

 

Số đếm khuẩn lạc				Số đếm khuẩn lạc				Số đếm khuẩn lạc
cao	thấp	tổng		cao	thấp	tổng		cao	thấp	tổng
280	223	503		309	249	558		338	275	613
281	224	505		310	250	560		339	276	615
282	225	507		311	251	562		340	277	617
283	226	509		312	251	563		341	278	619
284	226	510		313	252	565		342	278	620
285	227	512		314	253	567		343	279	622
286	228	514		315	254	569		344	280	624
287	229	516		316	255	571		345	281	626
288	230	518		317	256	573		346	282	628
289	231	520		318	257	575		347	283	630
290	232	522		319	258	577		348	284	632
291	233	524		320	259	579		349	285	634
292	234	526		321	260	581		350	286	636
293	234	527		322	260	582		351	287	638
294	235	529		323	261	584		352	287	639
295	236	531		324	262	586		353	288	641
296	237	533		325	263	588		354	289	643
297	238	535		326	264	590		355	290	645
298	239	537		327	265	592		356	291	647
299	240	539		328	266	594		357	292	649
300	241	541		329	267	596		358	293	651
301	242	543		330	268	598		359	294	653
302	243	545		331	269	600		360	295	655
303	243	546		332	269	601		361	296	657
304	244	548		333	270	603		362	297	659
305	245	550		334	271	605		363	297	660
306	246	552		335	272	607		364	298	662
307	247	554		336	273	609		365	299	664
308	248	556		337	274	611		366	300	666

6.2. Các ví dụ kiểm tra các đĩa song song

6.2.1. Ví dụ 1

Giả sử (24,12) là một cặp số đếm khuẩn lạc thu được thì 24 là giới hạn trên và 10 là giới hạn dưới. Vì 12 ³ 10 nên những số đếm này có thể được xem xét.

6.2.2. Ví dụ 2

Giả sử (97, 65) là một cặp số đếm khuẩn lạc thu được thì 97 là giới hạn trên và 65 là giới hạn dưới. Vì 65 = 65 nên những số đếm này có thể được xem xét.

6.2.3. Ví dụ 3

Giả sử (193, 142) là một cặp số đếm khuẩn lạc thu được thì 193 là giới hạn trên và 146 là giới hạn dưới. Vì 142 < 146 nên những số đếm này không được xem xét.

6.3. Các ví dụ kiểm tra các tổng của hai bước pha loãng liên tiếp

6.3.1. Ví dụ 1

Giả sử 232 là một số đếm/tổng quan sát được ở bước pha loãng 10^-x thì 12 là giới hạn dưới của số đếm/tổng ở bước pha loãng 10^-(x+1) và 37 là giới hạn trên của tổng / số đếm ở bước pha loãng 10^-(x+1). Nếu 15 là số đếm/ tổng quan sát được ở bước pha loãng 10^-(x+1) thì các tổng/ số đếm ở cả hai nồng độ có thể được xem xét, vì 12 < 15 < 37.

6.3.2. Ví dụ 2

Giả sử 357 là một số đếm/ tổng quan sát được ở bước pha loãng 10^-x thì 21 là giới hạn dưới của số đếm/ tổng ở bước pha loãng 10^-(x+1). Nếu 18 là số đếm/ tổng quan sát được ở bước pha loãng 10^-(x+1) thì các tổng/ số đếm ở cả hai bước pha loãng này không được xem xét, vì 18 < 21.

6.3.3. Ví dụ 3

Giả sử 151 là một số đếm/ tổng quan sát được ở bước pha loãng 10^-x thì 26 là giới hạn trên của số đếm/tổng ở bước pha loãng 10^-(x+1). Nếu 31 là một số đếm/ tổng quan sát được ở bước pha loãng 10^-(x+1) thì các tổng/ số đếm ở cả hai bước pha loãng không được xem xét, vì 31 > 26.

Bảng 2 – Các giới hạn quy ước cho tổng số đếm của hai đĩa song song hoặc số đếm từ một đĩa trên mỗi bước pha loãng của hai bước pha loãng thập phân liên tiếp

(với xác suất 99 % đối với mỗi phép so sánh)

10-x	10-(x+1)				10-x	10-(x+1)
Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến				Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến
	Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên			Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên
10	0	1,0	4		51	1	5,1	12
11	0	1,1	5		52	1	5,2	12
12	0	1,2	5		53	1	5,3	12
13	0	1,3	5		54	1	5,4	12
14	0	1,4	5		55	1	5,5	13
15	0	1,5	6		56	1	5,6	13
16	0	1,6	6		57	1	5,7	13
17	0	1,7	6		58	1	5,8	13
18	0	1,8	6		59	1	5,9	13
19	0	1,9	6		60	1	6,0	13
20	0	2,0	7		61	1	6,1	14
21	0	2,1	7		62	1	6,2	14
22	0	2,2	7		63	1	6,3	14
23	0	2,3	7		64	2	6,4	14
24	0	2,4	7		65	2	6,5	14
25	0	2,5	8		66	2	6,6	14
26	0	2,6	8		67	2	6,7	14
27	0	2,7	8		68	2	6,8	15
28	0	2,8	8		69	2	6,9	15
29	0	2,9	8		70	2	7,0	15
30	0	3,0	8		71	2	7,1	15
31	0	3,1	9		72	2	7,2	15
32	0	3,2	9		73	2	7,3	15
33	0	3,3	9		74	2	7,4	16
34	0	3,4	9		75	2	7,5	16
35	1	3,5	9		76	2	7,6	16
36	1	3,6	9		77	2	7,7	16
37	1	3,7	10		78	2	7,8	16
38	1	3,8	10		79	2	7,9	16
39	1	3,9	10		80	2	8,0	16
40	1	4,0	10		81	2	8,1	17
41	1	4,1	10		82	2	8,2	17
42	1	4,2	11		83	2	8,3	17
43	1	4,3	11		84	2	8,4	17
44	1	4,4	11		85	3	8,5	17
45	1	4,5	11		86	3	8,6	17
46	1	4,6	11		87	3	8,7	17
47	1	4,7	11		88	3	8,8	18
48	1	4,8	11		89	3	8,9	18
49	1	4,9	12		90	3	9,0	18
50	1	5,0	12		91	3	9,1	18

 

10-x	10-(x+1)				10-x	10-(x+1)
Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến				Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến
	Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên			Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên
92	3	9,2	18		136	6	13,6	24
93	3	9,3	18		137	6	13,7	24
94	3	9,4	18		138	6	13,8	25
95	3	9,5	19		139	6	13,9	25
96	3	9,6	19		140	6	14,0	25
97	3	9,7	19		141	6	14,1	25
98	3	9,8	19		142	6	14,2	25
99	3	9,9	19		143	6	14,3	25
100	3	10,0	19		144	6	14,4	25
101	3	10,1	19		145	6	14,5	26
102	3	10,2	20		146	6	14,6	26
103	4	10,3	20		147	6	14,7	26
104	4	10,4	20		148	6	14,8	26
105	4	10,5	20		149	6	14,9	26
106	4	10,6	20		150	6	15,0	26
107	4	10,7	20		151	6	15,1	26
108	4	10,8	20		152	7	15,2	27
109	4	10,9	21		153	7	15,3	27
110	4	11,0	21		154	7	15,4	27
111	4	11,1	21		155	7	15,5	27
112	4	11,2	21		156	7	15,6	27
113	4	11,3	21		157	7	15,7	27
114	4	11,4	21		158	7	15,8	27
115	4	11,5	21		159	7	15,9	27
116	4	11,6	22		160	7	16,0	28
117	4	11,7	22		161	7	16,1	28
118	4	11,8	22		162	7	16,2	28
119	4	11,9	22		163	7	16,3	28
120	5	12,0	22		164	7	16,4	28
121	5	12,1	22		165	7	16,5	28
122	5	12,2	22		166	7	16,6	28
123	5	12,3	23		167	8	16,7	29
124	5	12,4	23		168	8	16,8	29
125	5	12,5	23		169	8	16,9	29
126	5	12,6	23		170	8	17,0	29
127	5	12,7	23		171	8	17,1	29
128	5	12,8	23		172	8	17,2	29
129	5	12,9	23		173	8	17,3	29
130	5	13,0	24		174	8	17,4	29
131	5	13,1	24		175	8	17,5	30
132	5	13,2	24		176	8	17,6	30
133	5	13,3	24		177	8	17,7	30
134	5	13,4	24		178	8	17,8	30
135	5	13,5	24		179	8	17,9	30

 

10-x	10-(x+1)				10-x	10-(x+1)
Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến				Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến
	Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên			Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên
180	8	18,0	30		224	11	22,4	36
181	8	18,1	30		225	12	22,5	36
182	9	18,2	31		226	12	22,6	36
183	9	18,3	31		227	12	22,7	36
184	9	18,4	31		228	12	22,8	36
185	9	18,5	31		229	12	22,9	37
186	9	18,6	31		230	12	23,0	37
187	9	18,7	31		231	12	23,1	37
188	9	18,8	31		232	12	23,2	37
189	9	18,9	31		233	12	23,3	37
190	9	19,0	32		234	12	23,4	37
191	9	19,1	32		235	12	23,5	37
192	9	19,2	32		236	12	23,6	38
193	9	19,3	32		237	12	23,7	38
194	9	19,4	32		238	12	23,8	38
195	9	19,5	32		239	13	23,9	38
196	10	19,6	32		240	13	24,0	38
197	10	19,7	32		241	13	24,1	38
198	10	19,8	33		242	13	24,2	38
199	10	19,9	33		243	13	24,3	38
200	10	20,0	33		244	13	24,4	39
201	10	20,1	33		245	13	24,5	39
202	10	20,2	33		246	13	24,6	39
203	10	20,3	33		247	13	24,7	39
204	10	20,4	33		248	13	24,8	39
205	10	20,5	34		249	13	24,9	39
206	10	20,6	34		250	13	25,0	39
207	10	20,7	34		251	13	25,1	39
208	10	20,8	34		252	14	25,2	40
209	10	20,9	34		253	14	25,3	40
210	10	21,0	34		254	14	25,4	40
211	11	21,1	34		255	14	25,5	40
212	11	21,2	34		256	14	25,6	40
213	11	21,3	35		257	14	25,7	40
214	11	21,4	35		258	14	25,8	40
215	11	21,5	35		259	14	25,9	40
216	11	21,6	35		260	14	26,0	41
217	11	21,7	35		261	14	26,1	41
218	11	21,8	35		262	14	26,2	41
219	11	21,9	35		263	14	26,3	41
220	11	22,0	35		264	14	26,4	41
221	11	22,1	36		265	14	26,5	41
222	11	22,2	36		266	15	26,6	41
223	11	22,3	36		267	15	26,7	41

 

10-x	10-(x+1)				10-x	10-(x+1)
Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến				Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến
	Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên			Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên
268	15	26,8	42		312	18	31,2	47
269	15	26,9	42		313	18	31,3	47
270	15	27,0	42		314	18	31,4	47
271	15	27,1	42		315	18	31,5	47
272	15	27,2	42		316	18	31,6	48
273	15	27,3	42		317	18	31,7	48
274	15	27,4	42		318	18	31,8	48
275	15	27,5	42		319	19	31,9	48
276	15	27,6	43		320	19	32,0	48
277	15	27,7	43		321	19	32,1	48
278	15	27,8	43		322	19	32,2	48
279	16	27,9	43		323	19	32,3	48
280	16	28,0	43		324	19	32,4	49
281	16	28,1	43		325	19	32,5	49
282	16	28,2	43		326	19	32,6	49
283	16	28,3	43		327	19	32,7	49
284	16	28,4	44		328	19	32,8	49
285	16	28,5	44		329	19	32,9	49
286	16	28,6	44		330	19	33,0	49
287	16	28,7	44		331	19	33,1	49
288	16	28,8	44		332	20	33,2	50
289	16	28,9	44		333	20	33,3	50
290	16	29,0	44		334	20	33,4	50
291	16	29,1	44		335	20	33,5	50
292	16	29,2	45		336	20	33,6	50
293	17	29,3	45		337	20	33,7	50
294	17	29,4	45		338	20	33,8	50
295	17	29,5	45		339	20	33,9	50
296	17	29,6	45		340	20	34,0	51
297	17	29,7	45		341	20	34,1	51
298	17	29,8	45		342	20	34,2	51
299	17	29,9	45		343	20	34,3	51
300	17	30,0	46		344	20	34,4	51
301	17	30,1	46		345	20	34,5	51
302	17	30,2	46		346	21	34,6	51
303	17	30,3	46		347	21	34,7	51
304	17	30,4	46		348	21	34,8	52
305	17	30,5	46		349	21	34,9	52
306	18	30,6	46		350	21	35,0	52
307	18	30,7	46		351	21	35,1	52
308	18	30,8	47		352	21	35,2	52
309	18	30,9	47		353	21	35,3	52
310	18	31,0	47		354	21	35,4	52
311	18	31,1	47		355	21	35,5	52

 

10-x	10-(x+1)				10-x	10-(x+1)
Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến				Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến
	Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên			Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên
356	21	35,6	53		400	25	40,0	58
357	21	35,7	53		401	25	40,1	58
358	22	35,8	53		402	25	40,2	58
359	22	35,9	53		403	25	40,3	58
360	22	36,0	53		404	25	40,4	58
361	22	36,1	53		405	25	40,5	58
362	22	36,2	53		406	25	40,6	59
363	22	36,3	53		407	25	40,7	59
364	22	36,4	53		408	25	40,8	59
365	22	36,5	54		409	25	40,9	59
366	22	36,6	54		410	26	41,0	59
367	22	36,7	54		411	26	41,1	59
368	22	36,8	54		412	26	41,2	59
369	22	36,9	54		413	26	41,3	59
370	22	37,0	54		414	26	41,4	60
371	23	37,1	54		415	26	41,5	60
372	23	37,2	54		416	26	41,6	60
373	23	37,3	55		417	26	41,7	60
374	23	37,4	55		418	26	41,8	60
375	23	37,5	55		419	26	41,9	60
376	23	37,6	55		420	26	42,0	60
377	23	37,7	55		421	26	42,1	60
378	23	37,8	55		422	27	42,2	61
379	23	37,9	55		423	27	42,3	61
380	23	38,0	55		424	27	42,4	61
381	23	38,1	56		425	27	42,5	61
382	23	38,2	56		426	27	42,6	61
383	23	38,3	56		427	27	42,7	61
384	24	38,4	56		428	27	42,8	61
385	24	38,5	56		429	27	42,9	61
386	24	38,6	56		430	27	43,0	62
387	24	38,7	56		431	27	43,1	62
388	24	38,8	56		432	27	43,2	62
389	24	38,9	57		433	27	43,3	62
390	24	39,0	57		434	27	43,4	62
391	24	39,1	57		435	28	43,5	62
392	24	39,2	57		436	28	43,6	62
393	24	39,3	57		437	28	43,7	62
394	24	39,4	57		438	28	43,8	62
395	24	39,5	57		439	28	43,9	63
396	24	39,6	57		440	28	44,0	63
397	25	39,7	58		441	28	44,1	63
398	25	39,8	58		442	28	44,2	63
399	25	39,9	58		443	28	44,3	63

 

10-x	10-(x+1)				10-x	10-(x+1)
Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến				Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến
	Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên			Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên
444	28	44,4	63		488	32	48,8	68
445	28	44,5	63		489	32	48,9	69
446	28	44,6	63		490	32	49,0	69
447	29	44,7	64		491	32	49,1	69
448	29	44,8	64		492	32	49,2	69
449	29	44,9	64		493	32	49,3	69
450	29	45,0	64		494	32	49,4	69
451	29	45,1	64		495	32	49,5	69
452	29	45,2	64		496	32	49,6	69
453	29	45,3	64		497	33	49,7	70
454	29	45,4	64		498	33	49,8	70
455	29	45,5	65		499	33	49,9	70
456	29	45,6	65		500	33	50,0	70
457	29	45,7	65		501	33	50,1	70
458	29	45,8	65		502	33	50,2	70
459	29	45,9	65		503	33	50,3	70
460	30	46,0	65		504	33	50,4	70
461	30	46,1	65		505	33	50,5	70
462	30	46,2	65		506	33	50,6	71
463	30	46,3	65		507	33	50,7	71
464	30	46,4	66		508	33	50,8	71
465	30	46,5	66		509	33	50,9	71
466	30	46,6	66		510	34	51,0	71
467	30	46,7	66		511	34	51,1	71
468	30	46,8	66		512	34	51,2	71
469	30	46,9	66		513	34	51,3	71
470	30	47,0	66		514	34	51,4	72
471	30	47,1	66		515	34	51,5	72
472	31	47,2	67		516	34	51,6	72
473	31	47,3	67		517	34	51,7	72
474	31	47,4	67		518	34	51,8	72
475	31	47,5	67		519	34	51,9	72
476	31	47,6	67		520	34	52,0	72
477	31	47,7	67		521	34	52,1	72
478	31	47,8	67		522	35	52,2	73
479	31	47,9	67		523	35	52,3	73
480	31	48,0	68		524	35	52,4	73
481	31	48,1	68		525	35	52,5	73
482	31	48,2	68		526	35	52,6	73
483	31	48,3	68		527	35	52,7	73
484	31	48,4	68		528	35	52,8	73
485	32	48,5	68		529	35	52,9	73
486	32	48,6	68		530	35	53,0	73
487	32	48,7	68		531	35	53,1	74

 

10-x	10-(x+1)				10-x	10-(x+1)
Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến				Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến
	Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên			Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên
532	35	53,2	74		576	39	57,6	79
533	35	53,3	74		577	39	57,7	79
534	36	53,4	74		578	39	57,8	79
535	36	53,5	74		579	39	57,9	79
536	36	53,6	74		580	39	58,0	79
537	36	53,7	74		581	39	58,1	79
538	36	53,8	74		582	39	58,2	80
539	36	53,9	75		583	40	58,3	80
540	36	54,0	75		584	40	58,4	80
541	36	54,1	75		585	40	58,5	80
542	36	54,2	75		586	40	58,6	80
543	36	54,3	75		587	40	58,7	80
544	36	54,4	75		588	40	58,8	80
545	36	54,5	75		589	40	58,9	80
546	36	54,6	75		590	40	59,0	81
547	37	54,7	75		591	40	59,1	81
548	37	54,8	76		592	40	59,2	81
549	37	54,9	76		593	40	59,3	81
550	37	55,0	76		594	40	59,4	81
551	37	55,1	76		595	41	59,5	81
552	37	55,2	76		596	41	59,6	81
553	37	55,3	76		597	41	59,7	81
554	37	55,4	76		598	41	59,8	81
555	37	55,5	76		599	41	59,9	82
556	37	55,6	77		600	41	60,0	82
557	37	55,7	77		601	41	60,1	82
558	37	55,8	77		602	41	60,2	82
559	38	55,9	77		603	41	60,3	82
560	38	56,0	77		604	41	60,4	82
561	38	56,1	77		605	41	60,5	82
562	38	56,2	77		606	41	60,6	82
563	38	56,3	77		607	42	60,7	83
564	38	56,4	77		608	42	60,8	83
565	38	56,5	78		609	42	60,9	83
566	38	56,6	78		610	42	61,0	83
567	38	56,7	78		611	42	61,1	83
568	38	56,8	78		612	42	61,2	83
569	38	56,9	78		613	42	61,3	83
570	38	57,0	78		614	42	61,4	83
571	39	57,1	78		615	42	61,5	83
572	39	57,2	78		616	42	61,6	84
573	39	57,3	79		617	42	61,7	84
574	39	57,4	79		618	42	61,8	84
575	39	57,5	79		619	43	61,9	84

 

10-x	10-(x+1)				10-x	10-(x+1)
Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến				Số đếm/ tổng quan sát được	Dự kiến
	Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên			Giới hạn dưới	Số đếm/ tổng	Giới hạn trên
620	43	62,0	84		644	45	64,4	87
621	43	62,1	84		645	45	64,5	87
622	43	62,2	84		646	45	64,6	87
623	43	62,3	84		647	45	64,7	87
624	43	62,4	85		648	45	64,8	87
625	43	62,5	85		649	45	64,9	87
626	43	62,6	85		650	45	65,0	88
627	43	62,7	85		651	45	65,1	88
628	43	62,8	85		652	45	65,2	88
629	43	62,9	85		653	45	65,3	88
630	43	63,0	85		654	45	65,4	88
631	43	63,1	85		655	45	65,5	88
632	44	63,2	85		656	46	65,6	88
633	44	63,3	86		657	46	65,7	88
634	44	63,4	86		658	46	65,8	89
635	44	63,5	86		659	46	65,9	89
636	44	63,6	86		660	46	66,0	89
637	44	63,7	86		661	46	66,1	89
638	44	63,8	86		662	46	66,2	89
639	44	63,9	86		663	46	66,3	89
640	44	64,0	86		664	46	66,4	89
641	44	64,1	87		665	46	66,5	89
642	44	64,2	87		666	46	66,6	89
643	44	64,3	87

7. Công thức tính và các ví dụ

7.1. Trong Bảng 1

Xác suất, P, phù hợp với giới hạn C_dưới và C_trên­ được tính xấp xỉ:

trong đó:

C_dưới là giới hạn dưới từ các đĩa song song;

C_trên là giới hạn trên từ các đĩa song song.

7.2. Trong Bảng 2

Xác suất phù hợp P giữa số đếm/tổng quan sát được S₁ ở bước pha loãng 10^-x và S_dưới được chọn ở bước pha loãng 10^-(x+1) hoặc giữa số đếm/tổng quan sát được S₁ ở bước pha loãng 10^-x và giới hạn S_dưới ở bước pha loãng 10^-(x+1) hoặc giữa số đếm/tổng quan sát được S₁ ở bước pha loãng 10^-x và giới hạn S_dưới ở bước pha loãng 10^-(x+1) được tính xấp xỉ:

hoặc

trong đó

S1	là tổng hai số đếm của các đĩa song song hoặc kết quả của số đếm từ một đĩa ở bước pha loãng 10-x;
Sdưới	là giới hạn thấp hơn được chấp nhận ở bước pha loãng 10-(x+1);
Strên	là giới hạn cao hơn được chấp nhận ở bước pha loãng 10-(x+1).

7.3. Ví dụ

7.3.1. Ví dụ 1

Bước pha loãng	Đĩa 1 Số đếm khuẩn lạc	Đĩa 2 Số đếm khuẩn lạc
10-x	100	200
10-(x+1)	5	9

Trường hợp này không được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 1.

Trường hợp này được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 1.

Trường hợp này được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 2.

Trường hợp này không được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 2.

Do đó, số đếm 200 ở bước pha loãng 10^-x không so sánh được với kết quả song song 100 và các kết quả song song 5 và 9 ở bước pha loãng 10^-(x+1).

7.3.2. Ví dụ 2

Bước pha loãng	Đĩa 1 Số đếm khuẩn lạc	Đĩa 2 Số đếm khuẩn lạc
10-x	50	90
10-(x+1)	10	20

Trường hợp này không được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 1.

Trường hợp này được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 1.

Trường hợp này được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 2.

Trường hợp này không được chấp nhận, hãy so sánh các giá trị này với Bảng 2.

Số đếm 90 ở bước pha loãng 10^-x không so sánh được với kết quả song song 50. Các kết quả song song 10 và 20 ở bước pha loãng 10^-(x+1) có thể so sánh được, 50 và 90 ở bước pha loãng 10^-x là có thể so sánh được, nhưng 50 và 90 là các kết quả không chấp nhận được khi so sánh với 20. Báo cáo tất cả các kết quả đơn lẻ.