TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8685-26:2018 VỀ QUY TRÌNH KIỂM NGHIỆM VẮC XIN – PHẦN 26: VẮC XIN NHƯỢC ĐỘC PHÒNG BỆNH VIÊM THANH KHÍ QUẢN TRUYỀN NHIỄM (ILT) Ở GÀ

Hiệu lực: Còn hiệu lực

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA

TCVN 8685-26 : 2018

QUY TRÌNH KIỂM NGHIỆM VẮC XIN – PHẦN 26: VẮC XIN NHƯỢC ĐỘC PHÒNG BỆNH VIÊM THANH KHÍ QUẢN TRUYỀN NHIỄM (ILT) Ở GÀ

Vaccine testing procedure – Part 26: Infectious Laryngotracheitis Vaccine, Live

Lời nói đầu

TCVN 8685-26 : 2018 do Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc Thú y TW1 – Cục Thú y biên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.

Bộ TCVN 8685 Quy trình kiểm nghiệm vắc xin gồm các phn:

– TCVN 8685-1 : 2011, Phần 1: Vắc xin phó thương hàn lợn nhược độc;

– TCVN 8685-2 : 2011, Phần 2: Vắc xin viêm gan siêu vi trùng vịt;

– TCVN 8685-3 : 2011, Phn 3: Vắc xin Ecoli của lợn;

– TCVN 8685-4 : 2011, Phần 4: Vắc xin vô hoạt phòng hội chng giảm đẻ ở gà;

– TCVN 8685-5 : 2011, Phần 5: Vắc xin ung khí thán;

– TCVN 8685-6 : 2011, Phần 6: Vc xin Gumboro nhược độc;

– TCVN 8685-7 : 2011, Phần 7: Vắc xin nhiệt thán nha bào vô độc chng 34 F2;

– TCVN 8685-8 : 2011, Phần 8: Vắc xin dịch t lợn nhược độc;

– TCVN 8685-9 : 2014, Phần 9: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh Cúm gia cm A/H5N1;

– TCVN 8685-10 : 2014, Phần 10: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh Lở mồm long móng (FMD);

– TCVN 8685-11 : 2014, Phần 11: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh Phù đầu gà (coryza);

– TCVN 8685-12 : 2014, Phần 12: Vắc xin nhược độc, đông khô phòng hội chng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn (PRRS);

– TCVN 8685-13 : 2014, Phần 13: Vắc xin vô hoạt phòng hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản  lợn (PRRS);

– TCVN 8685-14 : 2017, Phần 14: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh viêm phổi thể kính ở lợn;

– TCVN 8685-15 : 2017, Phần 15: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh viêm phổi do pasteurella multocida type D gây ra ở lợn;

– TCVN 8685-16 : 2017, Phần 16: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh viêm teo mũi truyền nhiễm ở lợn;

– TCVN 8685-17 : 2017, Phn 17: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh viêm màng phổi ở lợn;

– TCVN 8685-18 : 2017, Phần 18: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh newcastle;

– TCVN 8685-19 : 2017, Phần 19: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh gumboro;

– TCVN 8686-20 : 2018, Phần 20: Vắc xin nhược độc phòng bệnh Newcastle;

– TCVN 8685-21 : 2018, Phần 21: Vắc xin phòng bệnh đậu gà;

– TCVN 8685-22 : 2018, Phần 22: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh tụ huyết trùng ở gia cầm;

– TCVN 8685-23 : 2018, Phần 23: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh Salmonella enteritidis ở gà;

– TCVN 8685-24 : 2018, Phn 24: Vắc xin vô hoạt phòng bệnh Salmonella typhimurium ở gà;

– TCVN 8685-25 : 2018, Phn 25: Vắc xin phòng bệnh gi dại ở lợn

– TCVN 8685-26 : 2018, Phần 26: Vắc xin nhược độc phòng bệnh viêm thanh khí quản truyền nhiễm  gà;

– TCVN 8685-27 : 2018, Phần 27: Vắc xin nhược độc phòng bệnh viêm phế quản truyền nhiễm ở gà.

 

QUY TRÌNH KIM NGHIỆM VẮC XIN – PHẦN 26: VẮC XIN NHƯỢC ĐỘC PHÒNG BỆNH VIÊM THANH KHÍ QUẢN TRUYỀN NHIỄM (ILT) Ở GÀ

Vaccine testing procedure – Part 26: Infectious Laryngotracheitis Vaccine, Live

1  Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định về quy trình kim nghiệm vắc xin nhược độc phòng bệnh Viêm thanh khí qun truyền nhiễm (ILT) do vi rút Laryngotracheitis gây ra ở gà.

2  Tài liệu viện dẫn

Các tài liệu viện dẫn sau rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chun này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mi nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).

TCVN 8684:2011 “Vắc xin và chế phm sinh học dùng trong thú y – Phép thử độ thuần khiết”

3  Ký hiệu và chữ viết tắt

ILT Infectious Laryngotracheitis
EID50 50 % Egg Infective Dose
ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Assay

4  Nguyên tắc

Vắc xin được kiểm tra các ch tiêu cảm quan, độ vô trùng bằng phương pháp phân tích trong phòng thử nghiệm và các chỉ tiêu an toàn, hiệu lực được đánh giá trên động vật thí nghiệm.

5  Vật liệu và thuốc thử

5.1  Gà 2 tuần tui, gà khỏe, không có kháng thể kháng vi rút ILT

5.2  Nước muối sinh lý, đã được hấp tiệt trùng, nng độ 0,9 %

5.3  Kit ELISA phát hiện kháng thể ILT

5.4  Trứng gà sạch, có phôi từ 9 ngày tui đến 11 ngày tuổi

6  Thiết bị, dụng cụ

Sử dụng các thiết bị, dụng cụ ca phòng thí nghiệm thông thưng và cụ thể như sau:

6.1  Micropipet đơn kênh, dung tích từ 0,5 µl đến 10 µl, từ 5 µl đến 50 µl, từ 50 µl đến 200 µl, từ 100 µl đến 1000 µl

6.2  Micropipet đa kênh, dung tích từ 5 µl đến 50 µl, từ 50 µl đến 200 µl

6.3  Đầu tip phù hợp với micropipet

6.4  Dao, kéo, panh kẹp vô trùng

6.6  Bơm tiêm, dung tích 1 ml, 3 ml, 5 ml

6.7  Máy đọc ELISA, có bước sóng từ 405 nm đến 650 nm

6.8  T ấm, duy trì nhiệt độ 37 °C

7  Cách tiến hành

7.1  Kiểm tra cảm quan

Quan sát bằng mắt thường, vắc xin đạt chỉ tiêu kiểm tra cảm quan khi lọ kín, không rạn nứt, chế phẩm xốp, màu đng nhất, hòa tan hoàn toàn trong nước muối sinh lý (5.2) sau 2 min có lắc nhẹ.

7.2  Kiểm tra vô trùng

7.2.1  Kim tra tạp nhiễm vi khuẩn. Theo TCVN 8684 : 2011

7.2.2  Kiểm tra tạp nhiễm nấm mc. Theo TCVN 8684 : 2011

7.3  Kiểm tra tính an toàn

· Nhỏ mắt mũi cho 10 gà (5.1), mỗi con 10 liều vắc xin ghi trên nhãn.

· Theo dõi toàn bộ gà thí nghiệm trong 14 ngày.

· Đánh giá kết quả: Vắc xin đạt tiêu chuẩn an toàn khi tt cả gà sống khỏe, phát triển bình thường và không có biểu hiện triệu chng của bệnh ILT như ủ rũ, xù lông, thở khó, hắt hơi, viêm mũi, viêm mí mắt, phù đầu.

7.4  Kiểm tra hiệu lực

Sử dụng 1 trong 2 phương pháp sau:

7.4.1  Phương pháp ELISA

Sử dụng 30 gà (5.1), chia làm 2 nhóm:

Nhóm 1: nhỏ vắc xin vào mắt mũi cho 20 gà, mỗi con 1 liều vắc xin ghi trên nhãn;

Nhóm 2: nhỏ nước muối sinh lý (5.2) vào mắt mũi cho 10 gà với liều lượng như gà nhóm 1.

Sau khi nhỏ vắc xin 28 ngày tất cả gà nhóm 1 và nhóm 2 được lấy máu, chắt huyết thanh để thực hiện phản ứng ELISA (tham khảo phụ lục A).

Đánh giá kết quả: Vắc xin đạt tiêu chun hiệu lực khi ít nhất 90 % mẫu huyết thanh của gà nhóm 1 đạt giá trị dương tính; trong khi đó ít nhất 80 % mẫu huyết thanh của gà nhóm 2 đạt giá tr âm tính.

7.4.2  Chuẩn độ hiệu giá vi rút

Vắc xin đạt tiêu chun hiệu lực khi mỗi liều vắc xin có hiệu giá vi rút  102.5 EID50 (xem phụ lục B)

8  Kết luận

Vắc xin đạt tiêu chuẩn kiểm nghiệm khi đạt các chỉ tiêu kiểm tra cm quan, kiểm tra vô trùng, kiểm tra tính an toàn và kiểm tra hiệu lực.

 

Phụ lục A

(Tham khảo)

Phản ứng ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)

A. Vật liệu thử

A.1.1  Huyết thanh gà cần kiểm tra

A.1.2  Nước cất 2 lần

A.1.3  Kit ELISA phát hiện kháng thể ILT

 DỤ: Dùng Kit ELISA của hãng SYNBIOTICS (Fowl laryngotracheitis virus antibody test kit – Item. No. 966231)I).

A. Cách tiến hành

A.2.1  Pha loãng huyết thanh (A.1.1) bằng dung dịch sample diluent theo tỷ lệ 1/50.

A.2.2  Dùng micropipet (6.1) hút 50 µl dung dịch sample diluent vào tất cả các giếng (từ giếng A1 đến giếng H12) của đĩa có phủ kháng nguyên ILT.

A.2.3  Dùng micropipet (6.1) hút 50 µl Negative control ILT vào giếng A1 và A2 của đĩa có phủ kháng nguyên ILT.

A.2.4  Dùng micropipet (6.1) hút 50 µl Positive control ILT vào giếng B1 và B2 của đĩa có phủ kháng nguyên ILT.

A.2.5  Dùng micropipet (6.2) hút 50 µl huyết thanh đã pha loãng (A.2.1) vào các giếng còn lại (trừ giếng A1, A2, B1, B2) của đĩa có ph kháng nguyên ILT.

A.2.6  Ủ đĩa ở nhiệt độ phòng trong 30 min (nhiệt độ từ 18 °C đến 25 °C).

A.2.7  Loại b dung dịch trong đĩa, rửa các giếng của đĩa bằng nước cất 2 lần (A.1.2), mỗi giếng 350 µnước ct, rửa từ 3 lần đến 5 ln, sau khi rửa xong vỗ đĩa vào giấy thấm cho khô nước.

A.2.8  Dùng micropipet (6.2) cho Goat Anti-Chicken Peroxidase Conjugate Solution đã pha loãng 1/100 vào tất cả các giếng của đĩa phản ứng, mỗi giếng 100 µl, sau đó ủ đĩa  nhiệt độ phòng trong 30 min nhiệt độ từ 18 °C đến 25 °C).

A.2.9  Loại bỏ dung dịch trong đĩa, rửa các giếng của đĩa bằng nước cất 2 lần (A1.2), mỗi giếng 350 µl ước ct, rửa từ 3 lần đến 5 lần, sau khi rửa xong vỗ đĩa vào giấy thấm cho khô nước.

A.2.10  Dùng micropipet (6.2) cho Tetramethylbenzidine substrate vào tất c các giếng của đĩa phản ứng, mỗi giếng 100 µl, sau đó ủ đĩa ở nhiệt độ phòng trong 30 min (nhiệt độ từ 18 °C đến 25 °C).

A.2.11  Dùng micropipet (6.2) cho dung dịch dừng phản ứng vào tất c các giếng của đĩa phản ứng, mỗi giếng 100 µl, sau đó đặt đĩa vào máy đọc ELISA (6.7)  bước sóng 405 nm đến 650 nm để ra các giá tr Optical Density (OD) của các mẫu trong đĩa phn ứng.

Sơ đồ vị trí mẫu trong đĩa ELISA

 

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

NC

NC

S7

S7

S15

S15

S23

S23

S31

S31

S39

S39

B

PC

PC

S8

S8

S16

S16

S24

S24

S32

S32

S40

S40

C

S1

S1

S9

S9

S17

S17

S25

S25

S33

S33

S41

S41

D

S2

S2

S10

S10

S18

S18

S26

S26

S34

S34

S42

S42

E

S3

S3

S11

S11

S19

S19

S27

S27

S35

S35

S43

S43

F

S4

S4

S12

S12

S20

S20

S28

S28

S36

S36

S44

S44

G

S5

S5

S13

S13

S21

S21

S29

S29

S37

S37

S45

S45

H

S6

S6

S14

S14

S22

S22

S30

S30

S38

S38

S46

S46

CHÚ THÍCH:

NC (negative control): đối chứng âm;

PC (positive control): đối chứng dương;

(sample): mẫu.

A.3  Công thức tính kết quả

 Đối chứng dương trung bình (PCx)

=

OD giếng A1 OD giếng A3

2

 

– Đối chứng âm trung bình (NCx)

=

OD giếng A2 + OD giếng A4

2

 

– Giá trị S/P

=

OD Mu – NCx

PCx

– Hiệu giá S/P log10 Titer = 1,450 (log10S/P) + 3,726

A.4  Điều kiện kết quả

Giá trị OD của đi chứng đạt điều kiện như sau thì phản ứng đạt:

0,25 < OD đối chứng dương – OD đối chứng âm < 0,9 (0,25 < PCx – NCx < 0,9)

OD đối chứng âm < 0,2 (NCx < 0,2)

A.5  Diễn giải kết quả

Giá trị S/P ≤ 0,15 mẫu kiểm tra âm tính (S/P  0,15 : N)

Giá trị S/P > 0,15 mẫu kiểm tra dương tính (S/P > 0,15 : P)

 

Phụ lục B

(Quy định)

Chuẩn độ hiệu giá vi rút trong vắc xin

B.1  Vật liệu thử

– Vắc xin cần kiểm tra

– Trứng gà sạch (5.4)

– Nước muối sinh lý (5.2)

B.2  Cách tiến hành

B.2.1  Vắc xin được pha loãng với nước muối sinh lý (5.2) theo cơ s 10 thành các nng độ từ nng độ 10-1 đến nng độ 1010.

B.2.2  Tiêm huyễn dịch vắc xin đã pha loãng (B.2.1) vào màng CAM (Chorioallantoic Membrane) của trứng gà sạch (5.4), mỗi trứng tiêm 0,1 ml.

B.2.3  p các trứng đã được tiêm (B.2.2) ở tủ ấm (6.8) trong 5 ngày, hàng ngày soi trng và loại b trứng chết phôi trước 24 h.

B.2.4  Sau 5 ngày theo dõi, trứng được mổ và kiểm tra bệnh tích đặc trưng của phôi trứng do vi rút ILT gây ra, đó là xuất hiện những mảng xám dày trên màng CAM của trứng, từ đó tính liều gây nhiễm của vi rút trong vắc xin cho 50 % phôi trứng (EID50) theo công thức Reed – Muench như sau:

LgEID50 = LgA + Xlgf

Trong đó:

X: Khoảng cách tỷ lệ

A: Nng độ pha loãng vi rút gây nhiễm cho trứng cận trên 50 %

A’: Tỷ lệ % trứng bị nhiễm cận trên 50 %

B’: Tỷ lệ % trứng bị nhiễm cận dưới 50 %

f: Cơ s pha loãng vi rút

 

Thư mục tài liệu tham khảo

[1] Asean standard requirements for Infectious Laryngotracheitis Vaccine, Live

[2] OIE: Chapter 2.3.3 Avian Infectious Laryngotracheitis

[3] 11 VR – 10KN1 – Quy trình Kiểm nghiệm vắc xin Viêm thanh khí quản truyền nhiễm (ILT) nhược độc



I) Thông tin này đưa ra tạo điều kiện thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn và không ấn định sử dụng sn phẩm của nhà cung cấp này. Có thể sử dụng các sn phẩm tương tự nếu cho các kết quả tương đương.

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8685-26:2018 VỀ QUY TRÌNH KIỂM NGHIỆM VẮC XIN – PHẦN 26: VẮC XIN NHƯỢC ĐỘC PHÒNG BỆNH VIÊM THANH KHÍ QUẢN TRUYỀN NHIỄM (ILT) Ở GÀ
Số, ký hiệu văn bản TCVN8685-26:2018 Ngày hiệu lực
Loại văn bản Tiêu chuẩn Việt Nam Ngày đăng công báo
Lĩnh vực Nông nghiệp - Nông thôn
Hóa chất, dầu khí
Ngày ban hành 01/01/2018
Cơ quan ban hành Tình trạng Còn hiệu lực

Các văn bản liên kết

Văn bản được hướng dẫn Văn bản hướng dẫn
Văn bản được hợp nhất Văn bản hợp nhất
Văn bản bị sửa đổi, bổ sung Văn bản sửa đổi, bổ sung
Văn bản bị đính chính Văn bản đính chính
Văn bản bị thay thế Văn bản thay thế
Văn bản được dẫn chiếu Văn bản căn cứ

Tải văn bản